儀器用具：
37℃及65℃水浴或恒溫槽

藥品試劑：
質(zhì)體pBluescript II SK （-）
限制酶：BamHI, PvuII 及ScaI （濃度均為10 units/μL, Invitrogen）
10×Reaction buffer 6 （0.5 M Tris-HCl, pH 7.4; 60 mM MgCl2; 0.5 M NaCl; 0.5 M KCl）
無(wú)菌水

方法步驟：
1） 取7 支微量離心管，依下表所列體積 （單位 μL） 依序加于管壁不同位置上。

◆ 每次吸取限制酶時(shí)，請(qǐng)換一支新的微量移液器頭以免造成污染。
總體積為20 μL，短暫離心后，以微量移液器頭輕輕混合，#1 置冰浴中，其余各管置于37℃反應(yīng)1 h。
2） 置65℃水浴15 min 中止反應(yīng)后，移置冰浴冷卻，即可進(jìn)行電泳分析。

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